思兰朵荣登国家医学期刊（一）

思兰朵荣登国家医学期刊
 沙棘提取物在美白祛斑化妆品中的研究与应用
       王汝柏
（威县人民医院，河北　邢台　054700）
【摘要】目的：沙棘提取物当其水溶液浓度为 10mg/ml 时，·OH 清除率为 85.3% 左右，酪氨酸酶抑制率为 83.0%。本文对沙棘提取物配制的祛斑霜进行安全性、稳定性、 美白祛斑功效质量检测，结果显示，沙棘提取物的配伍性良好，安全性和稳定性均符合《化妆品卫生规范 -2015 版》规定，在第 8 周时，皮肤 L 值、ITA°值、MI 值与初始值 均有显著性差异（P ＜ 0.05），持续使用对肤色有明显的提亮美白效果。
【关键词】沙棘提取物；抽提；安全；美白祛斑
【中图分类号】R793　　　　　【文献标识码】A　　　　　【文章编号】2095-4808（2020）11-026-01 前言 : 胡颓子科沙棘属植物富含多种维生素、微量元素、氨基酸和其他生物 活性物质的药用植物 [1] ，我国对沙棘的研究应用始于 1000 多年前，自 1977 年被 录入《中华人民共和国药典》。沙棘果实中含有大量的天然维生素（VC、VA、VE、 VK 等），其中 VC、VE 是抗氧化剂的主要组成；沙棘叶和果实中可提取熊果酸、β谷甾醇、洋地黄苷、α- 香树素等甾类化合物，其中甾醇类化合物对维持皮肤正常 代谢、改善表皮微循环起重要作用；沙棘全株含有丰富的黄酮多酚类化合物是重 要的生物活性物质，其化学结构可分为黄酮醇、二氢黄酮醇、黄烷醇、白花青素类、 查尔酮和花青素类等，以异鼠李素、槲皮素为优势活性组分，具有抗氧化、抗炎、心 脑血管保护、控制血糖等多种药用价值；沙棘中花青素含量较低，果实着色以胡萝 卜素和黄酮醇为主 [2] 。众多学者对沙棘的营养成分、药用价值分析做了大量的评 价研究，为沙棘的资源化利用奠定了坚实的基础。自由基与衰老关系紧密，酪氨 酸酶的催化活性升高及异常表达过量会促进黑色素的过量生成 [3] ，进而产生黄褐 斑、老年斑等色素问题。因此，化妆品不但要具有“美容、遮瑕”的作用，还应具有 “天然、营养、修复”的功能。日化市场热销“祛斑美白”产品，主要作用成分多是 有机合成产物，长期使用的安全性有待进一步评价。多种天然植物和中草药也同 样具有美白祛斑功效，作用温和安全、效果可靠，天然提取物的应用是未来“祛斑 美白”化妆品的发展趋势。沙棘中富含的维生素、α- 生育酚、β- 胡萝卜素及不 饱和脂肪酸，是“祛斑美白”化妆品不可替代的天然原料。北京江河沙棘公司通 过对沙棘油活性物质的有效保护，成功地研制出维生素 E 含量 >200mg/100g 且外 观清澈透明的日化工业用沙棘油。林建英提取沙棘果油中的多种维生素及其他 营养成分，复配其他化妆品原料，研制出沙棘保湿营养霜，该产品综合性能优异。 本文将沙棘提取物运用于“美白祛斑”化妆品中，通过测定沙棘提取物羟自 由基清除活性、酪氨酸酶抑制率，对沙棘提取物的美白作用进行综合评价。同时， 评价沙棘提取物祛斑霜配方的质量及安全，确保美白祛斑产品的安全使用效果。 1. 实验部分 1.1 沙棘提取物美白祛斑效果评价 1.1.1 自由基清除活性测试 , 采用 Fenton 法测定羟自由基清除活性。取适 量沙棘提取物，超纯水配制不同浓度的提取物溶液；用移液枪向消解试管内移取 100μl 5mmol/L FeSO4，100μl 5mmol/L 水杨酸，100μl 沙棘提取物溶液，混合均匀 静置 15min，在加入 100μl 5mmol/L 双氧水，静置反应 30min，测定反应液在 510 nm 处吸光度，需做空白试验。计算·OH 的清除率 [4] ：Y[1-Ai-Aj/Ac]×100% 式中， Ai- 沙棘提取物反应液的吸光度；Aj-H2O2 用超纯水替代的反应液吸光度；Ac超纯水替代沙棘提取物的反应液吸光度。 1.1.2 酪氨酸酶抑制率测定 , 通过蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法 [5] 测定酪 氨酸酶抑制率，48 孔酶联板，每孔分别加入 100μL 40U 酪氨酸酶溶液，1800μL 0.01mol/LPBS 缓冲溶液（pH=6.8），加入 100μL 不同浓度的沙棘提取物溶液，37℃ 孵育 10min，加入 0.15%L- 多巴溶液 1000μL，继续孵育 2min，测定 475nm 处吸光 度，进行空白实验，重复测试、3 次取均值。[(C-D)-(A-B)/A-B]×100% 式中， A加入酪氨酸酶溶液但无沙棘提取物溶液；B- 空白；C- 加入酪氨酸酶溶液和沙棘 提取物溶液； D- 加入沙棘提取物溶液但无酪氨酸酶溶液。 1.2 沙棘提取物配方评价 , 通过对沙棘提取物美白评价，选取最佳浓度为化 妆品配方添加浓度，结合科技资料查询和前期实验基础，设计配制以沙棘提取物 为主的祛斑霜，对祛斑霜的安全性、稳定性、美白祛斑功效进行评价。 1.2.1 面霜的制备 c 根据知医堂药业生产的焕颜祛斑霜成分，将 A、B 相原料 加热至 85℃溶解均匀；将 A 相缓慢匀速抽入 B 相，3000 r/min 均质乳化 5min，保 温搅拌 20min；降温至 50℃，将 C 相缓慢加入乳化锅中溶解均匀降温至 45℃，加 入 D 相混合均匀降温至 40℃加入 E 相，降温至 38℃出料，即得焕颜祛斑霜。      1.2.3 稳定性，稳定性评价包括感官指标及理化指标（耐热、耐寒、离心）。感官指标：面霜质地细腻，均匀一致，有一定香气；耐热稳定性实验：取适量面霜样品 于 25ml 比色管内，45℃保温 24h，降至室温观测面霜情况；耐寒稳定实验：实验包 装完整，置于 -15℃的冰箱内，持续 24 h，恢复室温后，观测面霜情况；离心试验 : 将适量面霜样品注入 10ml 离心管中，离心机转速 2000 r /min，离心 30 min 后取出， 观测面霜情况。
    1.2.4 美白祛斑功效，志愿者：受试者 20 人，24 岁 ~55 岁女性，符合《化妆品 接触性皮炎诊断标准及处理原则》受试标准。测试指标：①皮肤黑色素含量 MI 值： MI 值表征黑素指数，MI 值越大皮肤黑色素含量越高。②皮肤亮度 L 值、ITA° 值：ITA°值由皮肤黑白色度（L 值）、红绿色度（a*）、蓝黄色度（b*）计算得到，其 值越大，肤色明亮，反之，肤色晦暗。测试方法 [7] ：随机选取左、右手臂内侧为受试 区，另一侧为对照区，产品涂覆均匀，使用焕颜祛斑霜，每日早晚各涂一次，测试周 期共计 14 周。在测试周期内，受试部位不使用其它任何化妆品。测试分为初始 值（0 周）及使用面霜 1 周、2 周、8 周和 14 周后，受试者使用测试仪器测定涂抹 部位数值。SigmaStat 3.5 数据分析分软件进行统计分析，以皮肤黑色素含量及肤 色亮度变化，反应面霜的美白祛斑功效。测试环境：测试温度 22℃ ±1℃，湿度： 50%±5%。受试者静待 20 min 后进行测试。
    2. 结果与讨论 2.1 沙棘提取物制备 , 天然物质的提取方法主要有溶剂抽提浸取、超声 / 微波 提取、超临界流体萃取等，溶剂抽提是最长用的方法。本研究以以水和乙醇为溶 剂，可在适宜的温度下提取沙棘中大部分热稳定性的天然抗氧化活性物质，提取 过程杂质较少，降低了提取物后续除杂精制难度，溶剂易于回收。 2.2 美白祛斑效果评价 , 皮肤的美白祛斑可分为：①抑制黑色素合成酶（如酪 氨酸酶、多巴色素互变酶）活性，控制黑色素生成，促进黑色素代谢；②加强基体抗 氧化性，增强肌肤活性。自由基的清除能力的强弱可反应沙棘提取物抗氧化程度 的优劣，蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法可分析提取物对黑色素合成酶的抑制情况， 从而综合评价沙棘提取物的美白祛斑效果。沙棘提取物中，富含包括维生素、黄酮、 多糖、生物碱等。VE 可作为供氢体与脂质·OH 反应，阻止自由基的链式反应，延缓 脂质氧化，防止皮肤生皱和脂褐物质堆积；黄酮类活性物质与 VC 协同作用，抑制 酪氨酸酶活性，营养皮肤，促进增白。如图 2 所示，随着沙棘提取物溶液的浓度增 高，·OH 清除活性逐渐增大，对酪氨酸酶的抑制率也在逐步提高，当沙棘提取物浓 度达到 12mg/ml 时，·OH 清除率基本稳定在 85.3% 左右，酪氨酸酶抑制率虽有上 涨趋势，但涨幅波动较小，为 83.0%。从美白祛斑评价结果出发，综合考虑沙棘提 取物的溶解度、产品成本，美白祛斑产品中沙棘提取物的添加浓度可为 10mg/ml。